數顯可見分光光度計是一種常用的光譜分析儀器。其主要原理是在選擇性吸收現象基礎上測量物質的濃度,該原理也被稱為比色法。經過樣品的光線受到吸收后,產生一個比原來較弱的帶有物質色彩特征的光譜。可見光區域的波長范圍通常是400-800nm,因此數顯可見分光光度計使用濾波片選擇準確的波長范圍,將寬譜默認為單一波長,即所選范圍內的某個波長進行測量。適用于化學、生物、食品、醫藥等領域。其主要用途包括測定水溶液中某種離子、有機化合物、蛋白質、肽類以及酶的活性等。
樣品中物質吸收的程度與其濃度成正比,數顯可見分光光度計通過對透射光和進入樣品前的光強進行比較,測定了樣品中物質的吸光度。高濃度樣品的吸光度較大,而低濃度樣品的吸光度則較小。主要由光源、狹縫、棱鏡(或光柵)、濾波片、檢測器和顯示器組成。光源產生可見光,并將其發射至狹縫處。狹縫起到減少入射的光束寬度的作用,使它們成為平行的光線。由棱鏡(或光柵)引導的光束,被分散成多條波長不同的光譜,形成一個彩色圖像,接著選擇合適的濾波片進行過濾,只留下與該物質吸收峰匹配的波長。光線經過樣品(通常放置在立方體玻璃池中),吸收一部分后穿過檢測器,檢測器轉換為電信號。電信號被顯示器解釋和表示,并通過計算濃度值來確定樣品中要測定物質的含量。
使用數顯可見分光光度計測量樣品的方法主要包括以下幾個步驟:
1.打開儀器電源,按下預熱鍵。一般情況下,預熱時間為15-30分鐘,預熱完成后屏幕上會顯示出“OK”提示。
2.將試管架空載入儀器中,關閉光源調節旋鈕并將光程旋鈕調成大值。此時零位指示燈亮起,表示已進入調零狀態。然后打開光源調節旋鈕,逐漸調節到合適的光強度大小,并按下ZERO鍵復位。
3.將待測樣品放入比色皿中,并放入試管架中,打開光源和檢波室開關。根據需要選擇吸光度或所需檢測波長,并轉動光程旋鈕以使測量結果好。
4.當示波器振蕩穩定后,記錄示值即為該樣品的吸光度。如需多次測量同一樣品,請重新進行校零操作后再進行。
5.使用完畢后應及時清洗相關部件,避免交叉污染和對儀器造成損害。